[生命科学] 生物基础实验之PCR验证

生物基础实验之PCR验证

文章目录

• 生物基础实验之PCR验证
• • 实验步骤一
  • 实验步骤二
  • 实验步骤三 配胶
  • 实验步骤四 电泳
  • 实验步骤五 跑胶

实验步骤一

在离心管加入7.5μL Master Mix 溶液，5.5μL 蒸馏水，引物各0.5μL μL 以及1μL 模板（各种植物的DNA）。

实验步骤二

1 95℃ 3min 升温
2 95℃ 变性 30 s
3 58℃ 或者 60 ℃ 退火 30s
4 72℃ 延伸 45s
5 72℃ 延伸 45s 结束
选择 Files, 点击program，点击新建。然后点击Header, 如果是做PCR的话，Heaterd Lid 温度选择105℃。其他不用管。 图片实际的翻译时间设置可能和文字步骤不一致，以文字步骤为准。

实验步骤三 配胶

在等待PCR结果的过程中，先进行配胶。称量0.3g琼脂糖，加入20ml TAE 溶液 ，混合后放入微波炉中2min后溶液呈透明状后加入1μmol/L的核酸染料。（实验过程必须戴手套）。 琼脂浓度根据DNA片段大小来决定，片段大，浓度低，1000bp浓度约为1.5%。片段小，浓度高，200bp浓度约为2-3%。放入凝胶槽中。根据需要，选择不同大小的插板如下图所示，插板有大有小。批量大的实验可用大插板。 等待15分钟凝固后转移到电泳仪器中。

实验步骤四 电泳

取PCR反应好的DNA 7.0μL 插入点样孔中，最右侧放入Marker5000（视DNA长度选择不同的Marker）。电压U=140V， 反应时间=15分钟。然后开始电泳啦！

实验步骤五 跑胶

电泳15分钟结束后，取出凝胶后小心移入电泳仪中进行读取。

点击左上角照相，再点击左下脚照相机图标，即开始分析，得到电泳结果。根据DNA MAKER 对照DNA片段大小。到此实验就结束啦！