mRNA基本概念

mRNA是由DNA的一条链转录而来的（可以是正链，也可以是反链），DNA是由非编码区和编码区组成，编码区也有其特殊的结构，主要有外显子和内含子组成。

mRNA的一个重要性质就是可变剪切，也就是同一个编码区，可能会有不同的外显子组合。

mRNA的结构：5’端的帽子结构和3’端的polyA尾巴。

polyA和oligo（dT）是什么？它在mRNA纯化和反转录中有什么作用？

传统mRNA差异显示技术（DDRT-PCR）是根据绝大多数真核细胞mRNA3'端具有的多 聚腺苷酸尾（polyA）结构，因此可用含oligo（dT）的寡聚核苷酸为引物将不同的mRNA反转录成cDNA。该方法的创始人Liang P和Pardee A根据Poly A序列起点前2个碱基除AA外只有12种可能性的特征，设计合成了12种下游引物，称3′-锚定引物，其通式为5'-T11MN；同时为扩增出polyA 上游500bp以内所有可能性的mRNA序列，在5′端又设计了20种10bp长的随机引物。这样构成的引物对进行PCR扩增能产生出20000条左右的 DNA条带，其中每一条都代表一种特定mRNA种，这一数字大体涵盖了在一定发育阶段某种细胞类型中所表达的全部mRNA。将差别表达条带中的DNA回 收，扩增至所需含量，进行Southernblot或Northernblot或直接测序，从而对差异条带鉴定分析，以便最终获得差异表达的目的基因。