PCR | RT-PCR 的原理及应用

生物的东西必须要主动去了解，否则视野容易受到限制，尤其是分子生物学的核心技术。

PCR - 聚合酶链式反应

The Complete Guide to PCR (How it Works, Primer Design, and Running Reactions) - YouTube

目的：从DNA双链中扩增出感兴趣的区段，用于后续的研究。

原理：DNA结构，双螺旋，AT、GC配对；DNA双链在临界温度会解链，退火后又会恢复；引物，DNA复制的起点，之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已有的DNA链上。

操作核心：wiki上很全面

1. 引物设计，会考虑GC含量，决定退火温度；

2. 变性、退火和延伸；

PCR的应用 - PCR Applications—Top Seven Categories

1. Gene expression
2. Genotyping (detection)
3. Cloning
4. Mutagenesis
5. Methylation analysis
6. Sequencing
7. Medical, forensic, and applied sciences

问题：

1.真核生物的组蛋白会影响PCR吗？

2.为什么需要前后引物，前后引物是如何p出指定区段的？

RT-PCR 逆转录聚合酶链式反应

逆转录PCR，就是PCR的一个常规应用，我也跑过，见过庞大的机器，也是先设计引物，然后提cDNA，定量。

一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板透过PCR进行DNA复制。

PCA我们是扩增DNA序列，而RT-PCR我们扩增的是反转录出来的cDNA序列，然后再做PCR，把量做上去来检测，通常会配上一些管家基因作为对照。

RT-PCR的数据分析可以参照Y数微信公众号，代码很详细。